Характеристика эмбрионов ЭКО

Характеристика эмбрионов ЭКО

В процессе стимуляции овуляции на первом этапе ЭКО врачи получают не одну, а сразу несколько женских половых клеток.

Все, полученные клетки (ооциты), оплодотворяются методом ЭКО или ИКСИ. Однако в полость матки переносятся не все эмбрионы.

Как правило, это 1-2 самые перспективные, на взгляд эмбриолога, эмбриона.

Качество эмбрионов ЭКО мы оцениваем в основном по их морфологии. Существует множество критериев для оценки:

1. Число клеток в эмбрионе. В норме оно не должно быть больше или меньше количества, соответствующего дню развития эмбриона.
2. Степень фрагментации (безъядерные фрагменты цитоплазмы, количество и локализация которых, могут влиять на дальнейшее развитие эмбриона)
3. Равномерность и синхронность дробления. После слияния яйцеклетки и сперматозоида образуется зигота (оплодотворенная яйцеклетка, которая начинает активно делиться). Данный процесс называют дроблением, а клетки эмбриона – бластомерами. Они должны быть одинаковой формы и размеров.
4. Наличие в клеточной цитоплазме всевозможных включений или отсутствие таковых.

Также мы обращаем внимание на наличие так называемых мультиядерных бластомеров. Под данным термином подразумевают наличие бластомеров, имеющих не одно, а несколько ядер. В норме таких бластомеров быть не должно.

Оценка характеристик эмбрионов ЭКО

Существует несколько классификаций качества эмбрионов, находящихся на первых днях развития. Прежде всего, специалист смотрит на количество клеток.

В норме на 2 день развития эмбрион состоит из 2-4 клеток, на 3 день – из 6-8, и на 4 сутки – количество клеток сложно сосчитать, потому что начинается их слияние и эмбрион превращается в морулу.

При описании эмбриона 2-3 дня развития к числу, указывающему на количество бластомеров добавляется и буквенное, отражающее качество и морфологию самих бластомеров, и наличие или отсутствие фрагментации.

• А – безъядерные фрагменты отсутствуют, бластомеры ровные, одинакового размера, имеют одно ядро, гомогенная цитоплазма;
• В – количество безъядерных фрагментов цитоплазмы достигает 25%, но не превышает данную границу;
• С – число фрагментов без ядер находится в пределах от 25 до 50%, есть нарушения в размерах и форме бластомеров, имеются включения в цитоплазме;
• D – более 50% безъядерных фрагментов и т.д..

Данное состояние называется тотальной фрагментацией. Такие эмбрионы не используют для переноса в полость матки (за исключением той ситуации, когда нет эмбрионов другого качества, и пациент настаивает на переносе). Надо сказать, что даже в таких случаях может наступить нормальная беременность, только вероятность наступления будет во много раз ниже, чем при переносе эмбрионов качества А или В.

В «ВитроКлиник» мы пользуемся цифро-буквенными характеристиками. При этом цифра отображает количество бластомеров в эмбрионе, а буква – морфологию и качество.

Классификация бластоцист ЭКО

Бластоцистой называется эмбрион 5-6 суток развития. Он состоит из нескольких десятков клеток, соединенных в шаровидное образование с полостью, окруженный оболочкой. После разрыва этой оболочки (хэтчинга) начинается процесс имплантации (внедрения эмбриона в слизистую оболочку матки).

Существуют несколько классификации бластоцист, в «ВитроКлиник» мы используем шкалу Гарднера. Данная шкала состоит из одной цифры и двух заглавных букв. Цифра описывает размер полости бластоцисты, первая буква - качество эмбриобласта (внутренней клеточной массы), вторая буква - трофобласт (качество внешней клеточной массы):

1) Размер бластоцисты, объем ее полости:

1. Полость занимает менее 50% бластоцисты.
2. Полость занимает 50% бластоцисты.
3. Полость занимает более 75% бластоцисты.
4. Бластоциста, полость которой в 2 раза превышает клеточную массу.
5. Бластоциста, в которой началось вскрытие оболочки (хетчинг)
6. Бластоциста, полностью освобожденная от оболочки, готовая к имплантации.

2) Характеристика клеток, из которых будет развиваться зародыш (внутренняя клеточная масса):

• A. Клеток много, границы между клетками неразличимы.
• B. Клеточные формы различимы, отмечается наличие некоторых незначительных дефектов в них (зернистость, и т.д.)
• C. Дефекты в клетках значительные, имеются признаки апоптоза.
• D. Дегенерация клеточного состава.

3) Характеристика клеток внешней клеточной массы, которые формируют внезародышевые структуры (плацента, амниотическая оболочка).

Шанс успешного ЭКО зависит от многих факторов, важнейшим из которых является качество эмбриона. Эмбрионы плохого качества реже имплантируются в матку, значит шансы наступления беременности могут значительно снижаться.

Качество эмбрионов зависит от биологического материала и профессионализма врача. Поэтому очень важно внимательно выбирать клинику и ответственно подходить к рекомендациям врача в период подготовки к ЭКО.

Для выявления качества эмбрионов в процессе ЭКО существует специальная классификация. По ней врач оценивает состояние бластоцист и выбирает, какие лучше перенести в полость матки. Рассмотрим, какого качества бывают эмбрионы, как они формируются и приживаются.

В момент оплодотворения сперматозоидом яйцеклетка превращается в зиготу. Оплодотворения могут проводить в пробирке, либо при помощи вспомогательных методов ИКСИ и ПИКСИ.

В течение первых 24 часов зигота пытается делиться и в конце концов она раздваивается и образуются бластомеры. Уже на этом этапе врач может выбрать качественные эмбрионы, которые не отстают в развитии. Если зигота делится слишком медленно, то это является признаком нарушения.

Эмбрион продолжает активно дробиться, пока не образуется 8 бластомер. На этом этапе могут сформироваться однояйцевые близнецы. Как только бластомеры перестают дробиться, эмбрион превращает в морулу. Следующим этапом внутри эмбриона образуется полость и эмбрион продолжает дробиться, он превращается в бластоцисту из 16 и более клеток.

На этапе бластоцисты зародышу необходимо прикрепиться в полости матки, чтобы начать питаться от организма матери и продолжить расти. Такое состояние наступает на 5 день после оплодотворения.

Категории

При культивации эмбрионов врач производит условную оценку бластоцист. Это помогает выбрать самые качественные клетки для дальнейшей подсадки. Врач оценивает степень зрелости, внутриклеточную массу и толщину наружного слоя. Выставляя оценку из одной цифры и двух букв соответственно.

Рассмотрим, что означают эти цифры и буквы.

1 — не зрелая, полость составляет половину объема;

2 — бластоциста не больше, чем дробящийся эмбрион;

3 — бластоциста намного больше дробящегося эмбриона, полость большая;

4 — полость занимает всю бластоцисту, она начинает пробиваться через оболочку;

5 — бластоцисты продолжает разрывать оболочку;

6 — бластоциста без оболочки.

Первая буква А характеризует содержимое клетки, то есть ту массу, из которой будет в дальнейшем формироваться ребенок:

А — качественная, клеток много;

В — относительно качественная, имеет небольшие отклонения;

С — наблюдаются серьезные нарушения;

D — очень плохое качество бластоцисты.

Вторая буква описывает состояние внутриклеточной оболочки, от которой в последствии будет зависеть процесс прикрепления плода к стенке матки.

А — отличное качество, слой состоит из большого количества клеток;

В — есть небольшие отклонения, например, клеток меньше, либо они располагаются в два слоя;

С — клеток мало, слой плохого качества;

D — очень плохое качество слоя.

Таким образом, можно сделать вывод, что самый качественный эмбрион будет с обозначением 4АА и 5AA. Допустимы к подсадке все бластоцисты, кроме самых плохих и незрелых, который по определению не смогут имплантироваться.

Перенос

Перенос эмбрионов может проводиться не только на 5 сутки на стадии бластоцисты. В некоторых случаях может быть рекомендован более ранний перенос — на 3 сутки.

Культивирования эмбриона до стадии бластоцисты позволяет выбрать максимально качественные клетки, так как многие из них погибают в искусственных условиях. Подсадка качественных эмбрионов увеличивает шанс наступления беременности.

Но если женщина уже несколько раз неудачно прошла ЭКО с пятидневными бластоцистами, ей может быть рекомендован перенос трехдневных эмбрионов. Возможно, что им будет легче развиваться в естественных условиях и они выживут, сформировав здорового ребенка.

Стоит отметить, что классификация эмбрионов при ЭКО не является приговором. Даже если были получены эмбрионы плохого качества, беременность все равно может наступить. Часто врачи встречаются с ситуацией, когда женщина не может забеременеть с первоклассными бластоцистами. Но при переносе эмбрионов 3 класса беременность успешно наступала и рождался здоровый ребенок.

Культивирование

Начало культивирования зародышей происходит на следующий день после забора фолликулов. Врачом-эмбриологом производится оценка качества эмбрионов при ЭКО. Затем соединяются женские и мужские половые клетки, через некоторое время врач рассматривает под микроскопом скорость деления биоматериала.

Дата переноса бластоцист назначается в зависимости от количества биоматериала. Классификация эмбрионов по качеству при ЭКО определяется сутками.

Культивирование эмбрионов – это один из этапов ЭКО, поддерживающий жизнедеятельность зародыша перед их подсадкой в матку.

Зигота помещается в жидкость, схожую по температурному режиму и составу в маточных трубах. Создается подобная жидкость в лабораторных условиях. Чтобы клетки не погибли раньше времени, они постоянно находятся под присмотром медицинского персонала.

Какого качества бывают эмбрионы:

1. 2 сутки – при этом контуры бластомеров четкие, форма – правильная, высокая способность имплантации;
2. 3 сутки – бластомеры и цитоплазмы неровные, нормальная способность имплантации;
3. 4 сутки – удовлетворительная способность имплантации;
4. более 4 суток – неудовлетворительная способность имплантации.

Чтобы выбрать самые жизнеспособные зародыши, стараются использовать как можно больше яйцеклеток.

Качество

5 клеточный эмбрион считается нормой и достаточно часто применяется в медицинской практике. Для того, чтобы процедура ЭКО прошла успешно, обязательно проводится культивирование гамет. Качество эмбрионов для переноса при ЭКО зависит от многих факторов.

От чего зависит качество эмбрионов при ЭКО:

1. экология;
2. вредные привычки;
3. наличия заболевания половых органов;
4. иммунная система;
5. лишний вес;
6. несбалансированное питание;
7. стрессовые ситуации;
8. гормональные сбои.

Классы эмбрионов в ЭКО говорят о качестве биоматериала, от которого зависит исход процедуры.

Качество эмбрионов и их классы тесно связаны друг с другом. Существует 4 класса:

• класс А – полностью отсутствую безъядерные фрагменты;
• класс В–не более 20% безъядерных фрагментов от общего объема;
• класс С – содержание ануклеарных фрагментов от 21% до 50%;
• класс D – содержится более 50% безъядерных фрагментов, категория не используется для дальнейшего проведения процедуры.

Фрагментация эмбриона при ЭКО чаще всего говорит о каких-либо генетических нарушениях со стороны женских или мужских репродуктивных органах.

Классы

На сегодняшний день оценка качества зародышей происходит по количеству клеток, а также степени фрагментации.Если в карте ставится: эмбрионы 8а - это значит, что зигота содержит 8 клеток, а фрагментация полностью отсутствует. Также учитывается равномерность дробления, наличие вакуолей и отсутствие ядерных бластомеров.

Эмбрион bl1 – это маленькая бластоциста, качество которой на данном этапе оценить очень трудно. Имплантация дает положительные результаты в том случае, если хорошо развита внутренняя клеточная масса бластоцисты и трофобласт.

Эмбрион 4аа класса – это хорошее качество бластоцисты, имплантируется с вероятностью более 70%. Первая проверка качества зародыша происходит через 48 часов после изъятия яйцеклетки для проведения ЭКО. Оплодотворение яйцеклеток и качество зиготы оцениваются в первый день после подсадки.

Зародыши выбирают по следующим критериям:

1. степень фрагментации;
2. качество;
3. однородность и форма клетки;
4. время деление клетки;
5. отсутствие цитоплазмы.

Для проведения ЭКО оставляют только самые сильные зародыши для проведения.

Протокол культивирования

Протокол культивирования эмбрионов по дням проводится для того, чтобы выбрать более сильные зародыши.

Развитие зародышей происходит следующим образом:

• 1 день – проводится пункция;
• 2 день – клетки начинают делиться, при нормальном развитии должно быть от 2 до 4 бластомер;
• 3 день – здоровые клетки продолжают делиться, бластомеров уже от 6 до 8;
• 4 день – клетки разделяются на 10-16 бластомеров;
• 5-6 день – бластомеры превращаются в бластоцисты, что увеличивает шансы имплантации.

Самые лучшие среды для культивирования эмбрионов считается та, которая близка к среде жидкости, находящейся в маточных трубах. В каждом отдельном случае проводится индивидуальное культивирование эмбриона в естественном цикле, так как у каждой женщины сроки овуляционного цикла свои.

Расшифровка протокола производится исключительно врачом-эмбриологом на основании формы, цвета, размера бластоцисты. Лаборант ежедневно проводит исследование каждого зародыша и вносит отметку в карту. Такой подход помогает выбрать самый подходящий образец для подсадки в маточные трубы будущей матери.

Противопоказания

ЭКО не имеет противопоказаний, однако, при внутриматочном введении эмбриона существуют некоторые факторы, при которых данную процедуру проводить не рекомендуется.

К противопоказаниям относятся:

• опухоли различной этиологии;
• фиброма;
• нарушения функций репродуктивных органов;
• отсутствие матки;
• инфекционные заболевания;
• воспалительные процессы;
• обострения хронических заболеваний.

Если ЭКО несколько раз подряд не дает положительных результатов, это значит, что есть проблемы с яйцеклетками или сперматозоидами. В таком случае врачи советуют выбрать другой получения биоматериала, например, ИКСИ. Процедура подразумевает введение сперматозоида в цитоплазму ооцита.

Какой бы метод оплодотворения не использовался, часть материала останется непригодной. Одни зародыши быстро погибают, прекращая свой рост, другие имеют неподходящий генотип. По статистике в лучшем случае пригодны лишь 68% образцов. Культивирование помогает увеличить шанс прикрепления зародыша к матке. При хорошей подготовке приживается до 95% бластоцист.

Описание: День 0. Непосредственно после пункции оценивают зрелость полученных ооцит-кумулюсных комплексов (ОКК). ОКК с прозрачным кумулюсом как правило содержит зрелый ооцит и получает оценку «1-1».При пункции возможно получение зрелых, незрелых, а также дегенеративных и разрушенных яйцеклеток. Точная оценка состояния ооцита возможна только после его очистки перед проведением ИКСИ.

В зрелых, готовых к оплодотворению ооцитах определяется первое полярное тельце. В эмбриологическом протоколе зрелый ооцит обозначают MII.

Если процесс созревания ооцита в фолликуле нарушен или неправильно введен триггер (ХГ), то существует большая вероятность получения незрелых клеток, обозначаемых – MI и GV (Рис.1). Возможна и полная дегенерация ооцита (Deg).

Рис 1. Ооциты, полученные при пункции яичников после удаления кумулюса (денюдации). А - MII, Б – MI, В – GV. Pb – полярное тельце, ZP – блестящая оболочка

Через 18-20 часов после добавления сперматозоидов или ИКСИ (1-е сутки) при нормальном оплодотворении образуются два пронуклеуса. Это предшественники ядер будущих клеток-бластомеров, на которые начинает делиться оплодотворенная яйцеклетка. При правильном оплодотворении оба пронуклеуса четко различимы. В этом случае им присваивают оценку 2pN. Если пронуклеусов не видно, что обычно связано с отсутствием оплодотворения, в протокол записывается 0pN. При неправильном оплодотворении возможно появление нескольких пронуклеусов, что отражается в записи, например 3pN, 6pN и т.д.(Рис2). «Неправильно» оплодотворенные ооциты не пригодны для дальнейшей работы и утилизируются.

Рис 2. Первый день развития in vitro – формирование зиготы и образование пронуклеусов. А – 2pN (нормальное оплодотворение) – два пронуклеуса Б – 3pN (аномальное оплодотворение) – больше, чем два пронуклеуса.

Дальнейшее развитие эмбриона, дробление, происходит в течение пяти-шести дней. Оценка качества эмбрионов проводится через 40-42 часа (2 сутки), 72-74 часа (3 сутки) и 120 часов (5 сутки) после оплодотворения. Дробление эмбриона должно быть симметричным (получаются бластомеры одинакового размера) и равномерным (все бластомеры претерпевают деление). Для наглядности эмбриологи используют численно – буквенную систему оценки качества, где цифра означает количество бластомеров, а буква их качество. Для обозначения эмбриона хорошего качества используется буквенный индекс «А», среднего «B», низкого «С». Возможны и промежуточные варианты, например АВ, ВА, ВС, СВ, когда сложно дать однозначную оценку (Рис3).

2-й день (4А) 3-й день (8А) 4-й день (comp)

Рис 3. Дробление эмбриона в течение первых трех суток in vitro и компактная морула на 4-й день развития. Представлены эмбрионы отличного (А) качества. B – бластомер ZP – блестящая оболочка.

Для второго дня культивирования перспективными считаются эмбрионы с четырьмя бластомерами - 4А, 4АВ, 4В. Для третьего - восьмиклеточные (8А, 8АВ, 8В). Эмбрионы плохого качества (ВС, СВ, С) как правило не переносят, оставляют до пятого дня и при формировании нормальной бластоцисты замораживают или переносят в матку. В случае неравномерного дробления (наличия бластомеров разной величины) потенциал эмбриона к имплантации снижен, и обозначается это приставкой «un», например 3Вun. Наличие фрагментов цитоплазмы обозначают «fr», например 8ВСfr (Рис.4). Оценивается и наличие вакуолей. При их визуализации ставится отметка «vac». В норме каждый бластомер несет одно ядро, если хотя бы в одном бластомере визуализируется больше одного ядра, это называется мультинуклеацией (mN) и указывает на значительную вероятность хромосомной патологии данного эмбриона.

Рис 4. Дробление эмбриона в течение первых трех суток in vitro. Представлены эмбрионы хорошего (ВА, В) и удовлетворительного (ВС) качества. Во втором ряду эмбрионы с неравномерным дроблением (3Bun и 4BAun).

К концу третьих и на четвертые сутки культивирования эмбрион начинает компактизацию (границы его клеток становятся неразличимы) и готовится к образованию бластоцисты. Его клетки могут быть частично (p.comp) или полностью компактизованы (comp) (Рис.5). Обычно оценка эмбрионов на четвертые сутки не проводится ввиду малой информативности данной стадии развития. Однако наличие компактизации на вторые сутки может свидетельствовать об аномальном развитии и обязательно должна отражаться в эмбриологическом протоколе.

Рис 5. Стадия компактизации 4-е сутки культивирования A – p.comp Б - comp

На пятые сутки, примерно через 120 часов после оплодотворения эмбрион образует бластоцисту (Bl) (Рис.6). Оценка качества бластоцист подразумевает ее размер, который отражается цифрами от 1 до 5; состояние внутренней клеточной массы (ВКМ) (от «A» до «С») и окружающих ее клеток – трофобласта (от «а» до «с»). Лучшими для переноса будут бластоцисты размера от 3 до 5, имеющие многоклеточную ВКМ и трофобласт – Bl4Aa, Bl4Ab. Бластоцисты среднего качества обозначаются как – Bl2Bb, Bl3Bb, а плохого – BlCc.

Рис 6. Бластоцисты на пятый день развития in vitro. e.bl – ранняя бластоциста, Bl3Ab – экспандированная бластоциста, Bl5Ab – бластоциста перед хетчингом, ВКМ – внутренняя клеточная масса.

Дальнейшее развитие эмбриона происходит уже в матке после имплантации. Для успешной имплантации бластоцисте необходимо выйти из окружающей ее блестящей оболочки. Данный процесс называется вылупление, или хетчинг. В случае, когда эмбриолог отмечает изменения блестящей оболочки и после криоконсервации эмбрионов процесс самостоятельного вылупления бластоцисты может быть затруднен и его возможно облегчить применяя вспомогательный хетчинг. В нашем центре мы используем наиболее эффективный лазерный вспомогательный хетчинг.

Самая высокая частота оплодотворения получена при переносе эмбрионов на стадии бластоцисты. Так, в нашем центре она составляет 53%. В то время, как при переносе на стадии 6-8 бластомеров – 47%.

Замораживание и ПГД также лучше всего выполнять на стадии бластоцисты. Однако, не все эмбрионы доходят до бластоцисты. Поэтому общепринятым считается следующий подход: если на 5 день культивирования имеется меньше 5 эмбрионов, как минимум один переносят, остальные оставляют до 5 дня. Из достигших бластоцисты еще один может быть перенесен (двойной перенос), остальные замораживают. Если на 3 день эмбрионов 5 и больше, их не переносят и оставляют культивировать до 5 дня. На 5 день одну, реже две бластоцисты переносят, остальные замораживают.

В заключение следует отметить, что описываемые морфологические критерии оценки качества эмбрионов являются основными, необходимыми, но не всегда достаточными для выбора эмбриона для переноса. Так, нередко после переноса эмбрионов высшего качества имплантация не наступает и, наоборот, бывают случаи наступления и успешного развития беременности при переносе эмбрионов плохого качества. Поэтому существуют дополнительные способы прогноза имплантации эмбриона (time-laps, ПГС, анализ метаболитов и др.), которые дополняют морфологические критерии и обеспечивают в совокупности выбор лучшего эмбриона.

Бластоциста в процессе хетчинга (выхода из блестящей оболочки для имплантации)

А – световая микроскопия HMC контраст Б – Сканирующая электронная микроскопия - ZP – блестящая оболочка TE – трофэктодерма ВКМ – внутренняя клеточная масса

Результаты экстракорпорального оплодотворения зависят от огромного количества факторов, однако именно эмбриологический этап процедуры имеет важнейшее, практически определяющее результат, значение.

Проведение манипуляций с человеческими эмбрионами, имеющими микроскопические размеры - это сложная область медицины. Поэтому в процессе работы врачи используют сложную терминологию. В данной статье Апрышко Валентина Петровна, заведующая лабораторией эмбриологии одной из московских клиник, расскажет о методах и критериях оценки качества эмбрионов.

Самостоятельно принимать решения, связанные с выбором эмбриона или даты его переноса в матку могут только специалисты-эмбриологи. Однако после прочтения данного материала вы начнете понимать медицинские обозначения типа «8С».

День первый

Сразу после оплодотворения доктор проверяет признаки того, что процедура ИКСИ, ПИКСИ или ЭКО проходит успешно. Для этого он смотрит, как выглядят пронуклеусы, и оценивает их:

• наличие;
• количество;
• внутреннюю структуру;
• симметричность;
• внешний вид.

Пронуклеусы - это ядра половых клеток (мужских и женских), которые еще не слились. Изучая их вид, можно оценивать перспективы, качество и жизнедеятельность будущих эмбрионов.

Критерии нормы:

• пронуклеусов должно быть два;
• они должны располагаться рядом;
• их размеры должны быть одинаковыми;
• внутри должны визуализироваться «ядрышки» (пронуклеоли);
• «ядрышки» должны иметь правильное расположение и количество.

На данном этапе развития эмбрионов может формироваться множество патологий, которые ведут к их гибели. Например:

• присутствие одного пронуклеуса вместо двух (оплодотворение не состоится);
• наличие трех пронуклеусов (эмбрион нежизнеспособен, так как будет иметь тройной хромосомный набор).

Плохие эмбрионы сразу отбраковывают. Нет смысла их пересаживать. Даже если они не погибают на этапе культивации, организм женщины сам отторгает такие зародыши. В результате если беременность наступает, она очень быстро прерывается. Это происходит уже в первые недели гестации.

Гестация, гестационный возраст новорожденного (от лат. gestatio ношение) - количество полных недель беременности, прошедших между первыми сутками последней менструации роженицы и моментом перерезания пуповины во время родов.

День второй

На второй день культивации клетка делится на две. Образуются бластомеры.

Бластоме?ры — клетки эмбрионов на этапе дробления. Оплодотворенная яйцеклетка делится на две дочерние клетки, называемые бластомерами. Каждый бластомер делится на две новые дочерние клетки, которые также получают название бластомеров.

Критериями качества эмбриона на данном этапе являются его:

• размеры;
• форма;
• степень фрагментации (объем, который внутри эмбриона занимают безъядерные элементы цитоплазмы);

Чем больше внутри эмбриона бластомеров и чем меньше степень фрагментации, тем более качественным он считается. Такой зародыш имеет большой потенциал к дальнейшему нормальному развитию.

Многие эмбриологи используют классификацию, отражающую качество эмбрионов с помощью четырех букв латинского алфавита. Вот эта классификация:

• А - безъядерных фрагментов нет, высококачественный эмбрион;
• В - фрагментация до 20%, эмбрион среднего качества;
• С - содержание безъядерных элементов цитоплазмы больше 20%, но не достигает 50%, эмбрион удовлетворительного качества;
• D - количество ануклеарных (безъядерных) фрагментов цитоплазмы превышает 50%, такой эмбрион считается некачественным.

Также в этой классификации используются цифры, которые отражают количество бластомеров. Чем их больше, тем продукт слияния мужской и женской половых клеток считается лучше. Например, эмбрион «4В» оценивается более высоко, чем «3С». Ведь в нем больше бластомеров и меньше фрагментация.

День третий

Нормальный эмбрион на третий день развития имеет от 7 до 9 бластомеров. Он уже начинает выполнять заложенную в нем генетическую программу.

На данном этапе многие зародыши прекращают свое развитие. Это происходит по причине наличия дефектов генетического материала.

«Блок развития» - так называют эмбриологи явление, которое обеспечивает естественный отбор. Процесс размножения весьма сложен. В ДНК часто случаются поломки. «Поломанные» эмбрионы останавливаются в развитии.

Оценка их качества происходит точно так же, как на второй день. Используется аналогичная классификация. Только бластомеров становится больше. Поэтому описываются они, например, как 8А.

День четвертый

Если бы развитие эмбриона происходило в естественных условиях, он попал бы в полость матки на четвертый день после оплодотворения. До этого времени он находится в маточной трубе.

На четвертый день зародыш состоит из 10-16 бластомеров. Он становится более компактным - занимает небольшой объем относительно количества клеток. Его поверхность выглядит более гладкой, чем на третий день.

Морула - так называется стадия развития эмбриона на данном этапе. В переводе это означает «тутовая ягода». Так эмбриологи назвали его именно за внешнее сходство с этой ягодой.

Заканчивается данная стадия кавитацией. Так называется процесс образования полости внутри эмбриона.

День пятый

На пятый день развития эмбрион достигает стадии, которая называется бластоциста. Это значит, что полость внутри эмбриона уже достигла 50% от его общего объема.

В отличие от предыдущих стадий развития, бластоциста состоит из разных клеток:

• Трофобласт . Находится снаружи. Эта часть эмбриона отвечает за его внедрение (имплантацию) в слизистую оболочку матки. Из него будет развиваться плацента и прочие внезародышевые оболочки.
• Эмбриобласт . Находится внутри. Из этих клеток в дальнейшем сформируются органы и ткани плода.

Именно на этой стадии в большинстве случаев врачи пересаживают эмбрион в матку женщины. Также их можно замораживать. Это делают, чтобы сохранить «лишние» эмбрионы на следующий цикл.

Весь эмбрион окружен блестящей оболочкой. После переноса эта оболочка разрывается. Бластоциста выходит наружу и встраивается в стенку матки. Этот процесс называется hatching, что означает «вылупление».

Некоторым супружеским парам проводят преимплантационную диагностику для раннего выявления хромосомных и генетических мутаций. В таком случае ПГД делают именно на данном этапе, когда часть клеток начинает выступать за внешнюю оболочку.

На данном этапе развития критериями качества эмбриона являются:

• размер внутренней полости;
• степень проникновения эмбриона за оболочку;
• количество и плотность клеток.

Размер внутренней полости оценивается цифрами, два других критерия - буквами.

Исходя из размеров, выделяют шесть степеней зрелости бластоцисты:

• 1 - полость внутри эмбриона менее 50% (ранняя бластоциста);
• 2 - полость внутри эмбриона более 50% от его объема;
• 3 - полость занимает весь объем эмбриона;
• 4 - полость увеличивается, а оболочка эмбриона становится тоньше (расширенная бластоциста);
• 5 - трофэктодерма (наружный слой бластоцисты) проникает сквозь блестящую оболочку;
• 6 - бластоциста «вылупляется» и покидает оболочку.

Клетки качественного эмбриона должны быть сгруппированными. Представьте себе теннисные мячики, которые упакованы внутри футбольного мяча. Чем их больше, и чем плотнее расположены, тем лучше эмбрион.

Данный параметр отражается буквами:

• А - плотно упакованный «футбольный мяч» с большим количеством клеток;
• В - среднее количество клеток внутри бластоцисты;
• С - малое количество клеток.

Оценивается также трофэктодермальный слой. Продолжая аналогию, можно сравнить его с кожей, из которой пошит футбольный мяч. Чем меньше сегментов (клеток), и чем плотнее они расположены, тем лучше.

Данный параметр тоже оценивается буквами латинского алфавита:

• А - много клеток;
• В - среднее количество клеток;
• С - мало клеток.

Соответственно, общая характеристика эмбриона отображается цифрой и двумя буквами. Например, запись 4АА означает, что эмбрион находится на стадии расширенной бластоцисты, внутри содержится много клеток, и снаружи его трофэктодерма тоже представлена большим количеством клеток.

Процесс развития эмбриона очень сложен. Процедура ЭКО считается удачно проведенной, если хотя бы 40% из них на пятый день развития достигли стадии бластоцисты хорошего качества.

Один или два эмбриона переносятся в матку. Остальные можно заморозить. Если текущий протокол ЭКО не завершится беременностью, их можно будет использовать в следующем цикле. В клинике ЭКО при заморозке используется метод витрификации, то есть сверхбыстрого замораживания, что позволяет защитить эмбрионы от повреждения кристаллами льда.